Secuencia de apertura
La secuencia de apertura de Los Simpson es una de las señas de identidad más memorables de la serie. La mayoría de episodios comienzan con la cámara acercándose al título de la serie hacia la ciudad de Springfield. Luego la cámara sigue el regreso a casa de los miembros de la familia. Al llegar a casa la familia se sienta en el sofá a ver la tele. Esta secuencia fue creada por David Silverman. La sintonía característica de la serie fue compuesta por el músico Danny Elfman en 1989, después de que Groening le solicitara una pieza estilo retro. Esta pieza, que tardó dos días en crear, ha sido reconocida por Elfman como la más popular de su carrera.

Una de las características más notables de esta secuencia es que hay varios segmentos que cambian de un episodio a otro. Bart escribe cosas diferentes en la pizarra de la escuela, Lisa a veces toca un solo distinto de saxo y hay un gag visual distinto cada vez que la familia entra al cuarto de estar.

Especiales de Halloween
El episodio especial de Halloween se ha convertido en una tradición. El primer especial de Halloween, Treehouse of Horror, se emitió en la segunda temporada de Los Simpson y estableció el patrón de contar tres historias autoconclusivas por episodio de Halloween. Estos segmentos normalmente presentan a la familia en algún escenario terrorífico, de ciencia ficción o sobrenatural que a menudo parodian u homenajean otras obras de esos géneros. Estos segmentos están siempre fuera de la continuidad normal de la serie. Aunque los episodios de Halloween se supone que deben ser vistos en esa fecha, en los últimos años son emitidos más tarde debido al contrato de la Fox con la Serie Mundial de Grandes ligas de béisbol.

Chistes
La mayoría de los personajes principales y secundarios de la serie tienen un latiguillo (frase o expresión que repiten con frecuencia). Entre las expresiones más notables se encuentra el gruñido fastidiado de Homer "D'oh!", el "Excelente" del Sr. Burns o la risa de Nelson Muntz "¡Ja! ¡ja!". Algunos de los latiguillos de Bart como "¡Ay, caramba!" aparecieron en camisetas durante los primeros años de la serie. Sin embargo, Bart no volvió a usar esas frases desde que se volvieron famosas por el merchandising. El uso de muchos de los latiguillos ha ido reduciéndose en las últimas temporadas. El uso de latiguillos como forma de hacer humor fue parodiado en el episodio "Bart Gets Famous" en el que Bart adquiere una inmensa popularidad tras decir en el show de Krusty el payaso la frase "I didn't do it." ("Yo no he sido" en España y "Yo no fui" en Latinoamérica)

La serie también inserta referentes culturales que cubren un amplio espectro de la sociedad, para que espectadores de todas las generaciones puedan disfrutarlas. Dichas referencias pueden venir del cine, la televisión, música, literatura, ciencia e historia. Siempre que les es posible, los animadores introducen chistes ocultos en forma de textos incongruentes en carteles, periódicos o donde sea. El público a menudo no percibe todos los chistes visuales en un primer visionado. Kristin Thompson argumenta que Los Simpson incluyen "una batería de referencias culturales, caracterización intencionadamente inconsistente y considerable auto-reflexión acerca de las convenciones televisivas y el status del programa."